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脱氢抗坏血酸(DHA)检测试剂盒(菲咯啉微板法)主要用于植物组织中的维生素C(抗坏血酸)的检测，计算出总抗坏血酸含量，从中减去样品中原有的还原型抗坏血酸含量，即得脱氢抗坏血酸含量。

利用还原剂将脱氢抗坏血酸还原成还原型抗坏血酸，在酸性条件下还原型抗坏血酸把三价铁离子还原成亚铁离子，后者与菲咯啉形成稳定的红色螯合物，以酶标仪534nm处检测吸光度，在一定浓度范围(样品浓度控制在1～40μg/mL)吸光度与抗坏血酸含量呈线性关系，获得抗坏血酸含量。

维生素C(Vitamin C)又称L-抗坏血酸(AsA)，是高等灵长类动物与其他少数生物的必需营养素，在生物体内维生素C是一种抗氧化剂，为酸性己糖衍生物，是稀醇式己糖酸内酯，保护身体免于自由基的威胁，同时也是一种辅酶，其广泛的食物来源为各类新鲜蔬果。Vc有L-型和D-型两种异构体，只有L-型的才具有生理功能，还原型和氧化型都有生理活性。

• 反应稳定，不易褪色；
  
• 操作简便；
  
• 还原糖及其他常见的还原物质对实验没有干扰，因此专一性好；
  
• 灵敏度高。

• 蒸馏水、无水乙醇
  
• 研钵或匀浆器、离心机、离心管或试管、pH试纸或pH计、酶标仪、酶标条

• 上述低温试剂避免反复冻融，以免失效或效率下降。
  
• 5×组织匀浆液久置或低温保存，容易产生乳白色浑浊；如果白色浑浊不明显，可以直接使用，不影响效果；如果白色浑浊较多，应弃用。
  
• 5×组织匀浆液有腐蚀性，请小心操作。
  
• 待测样品如不能及时测定，应置于2～8℃保存，3天内稳定。
  
• 如果样品浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

• 稀释组织匀浆液：按5×组织匀浆液∶蒸馏水＝1∶4的比例稀释，获得1×组织匀浆液，待用。
  
• 制备AsA提取液：取待测材料如青菜、水果、松针等，清洗擦干，准确称量2.5g，加入研磨器内，再加入少量1×组织匀浆液，研磨碎，留取上清，再次用1×组织匀浆液研磨，最后一并倒入50mL离心管，补充1×组织匀浆液至22.5mL，充分混匀，4000g离心5min，留取上清液即为AsA提取液。
  
• 制备DHA待测液：取4mL AsA提取液，加入2mL DHA还原液，用NaOH溶液调节pH至7~8，室温下静置10min，使脱氢抗坏血酸还原成抗坏血酸，再加入1.6mL组织匀浆液(5×)和0.4mL蒸馏水即为DHA待测液。
  
• 配制系列抗坏血酸标准：将Vitamin C标准20mg用2mL 1×组织匀浆液溶解，再稀释至50μg/mL，取干净的96孔板，按下表进行操作，依次稀释。
  

  加入物(μL)	1	2	3	4	5	6
  抗坏血酸(50μg/mL)	1	4	7	10	20	40
  1×组织匀浆液	49	46	43	40	30	10
  抗坏血酸浓度(μg/mL)	1	4	7	10	20	40

• DHA加样：按照下表设置空白孔、标准孔、AsA测定孔、DHA测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的抗坏血酸含量过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置2平行孔，求平均值。
  

  加入物(μL)	空白孔	标准孔	AsA测定孔	DHA测定孔
  1×组织匀浆液	100	50	50	－
  系列抗坏血酸(1～6号)	－	50	－	－
  上清液	－	－	50	－
  DHA待测液	－	－	－	100
  无水乙醇	50
  酸性缓冲液	25
  AsA Assay buffer	25
  菲咯啉显色液	50

• DHA测定：立即混匀，30℃条件下反应60min，以空白调零，酶标仪测定534nm处系列标准孔、AsA测定孔、DHA测定孔的吸光度。